Los Guardianes del Santuario de Tupãrenda conforman un equipo de servicio voluntario comprometido con la hospitalidad y la vivencia espiritual dentro del predio del santuario. Su labor inicia a las 08:00 hs. con una oración de consagración y se extiende hasta la tarde (16:00 hs. en invierno o 17:00 hs. en verano). A lo largo del día, asumen tareas clave de recepción y orientación, priorizando a quienes visitan el lugar por primera vez, apoyo en la logística y orden de las celebraciones eucarísticas, guardia en el museo y participación en actos devocionales como el rezo del Ángelus, la Hora Santa y el rezo del Rosario. Asimismo, colaboran activamente con la Pastoral de Sanación y la quema de capitalario los terceros domingos del mes. Su jornada fomenta también la fraternidad interna mediante el almuerzo compartido y espacios de formación espiritual, registrando al cierre cada día de servicio en el libro de novedades del grupo bajo el espíritu del «Nada sin Ti, nada sin nosotros».